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Optimización de la regeneración de brotes in vitro y transformación mediada por Agrobacterium de Brassica napus- (Spanish)

Amin Ravaei, Parissa Jonoubi, Ali Hatef Salmanian

Department of Plant Biology, Faculty of Biological Sciences, Kharazmi University, Tehran, Iran

Department of Plant Biotechnology, National Institute of Genetic Engineering and Biotechnology (NIGEB), Tehran, Iran

Key words: Rapeseed, Agrobacterium, GUS gene, tissue culture.

Resumen

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Colza (Brassica napus L.) es uno de los cultivos de aceite más cultivados en el mundo. Sus variedades genéticamente albergando nuevas características dependen significativamente de establecimiento de un eficiente cultivo de tejido in vitro y de transformación. En este estudio el potencial de regeneración de brotes de dos cultivares de B.napus, RGS003 y PF7045-91 y su transformación mediada por Agrobacterium utilizando tres métodos fueron investigados. Hipocotilo y explantes cotiledonares de plántulas de 5, 10 y 15 días de edad fueron utilizados para la regeneración de lanzamiento indirecto y directo, respectivamente. Los explantes de hipocótilo demostraron la mejor formación de callo en 0,5 mg/L 2, 4-D. Los callos y explantes cotiledonares fueron regenerados en 3 a 4,5 mg/L BAP, con éxito. Los brotes regenerados madurados y arraigados entonces en 0.5 mg/L de IBA. Para transformación genética, ambos explantes fueron infectados por Agrobacterium mediante inmersión, incubación y métodos bien fundamentados. Ninguno de los explantes de hipocótilo Haz transformado. La frecuencia de transformación de los explantes cotiledonares en bien fundamentado método fue mayor que los otros, mostrando un incremento del 15%. Las plántulas transgénicas supuestas obtenidas mantienen verde en presencia de kanamicina. La transformación confirmada por PCR y análisis histoquímica de GUS. El método de inoculación bien fundamentado parecía prometedor para mejorar la eficiencia de transformación basados en el cotiledón.

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